Основы практической биохимии
Раздел большого практикума по биохимии «Основы практической биохимии» ставит своей целью познакомить студентов кафедры биохимии с базовыми практическими навыками биохимика-экспериментатора, такими как приготовление концентрированных и разбавленных растворов кислот и щелочей, калибровка рН-метра по стандартным растворам, приготовление буферных растворов. Каждому студенту дается возможность самостоятельно изучить свойства какой-либо буферной системы, будь то неорганический буфер (фосфатный, ацетатный, цитратный, боратный) или буфер Гуда (трис-буфер, MES, HEPES, MOPS). Кроме того, каждый студент изучает свойства какой-либо аминокислоты как пример буферной системы. Данные навыки подкрепляются семинарами по теории буферных растворов, а также семинаром по изучению аминокислот и их свойств.
Помимо этого, в рамках данного раздела студенты учатся готовить растворы белков и измерять их концентрацию различными способами (спектрофотометрическим методом, микробиуретовым методом, методом Лоури и микрометодом Бредфорда). Также студенты исследуют влияние различных веществ на концентрацию белка.
Продолжительность курса: осенний семестр III курса.
Форма отчетности: В течение семестра студенты пишут две домашние работы и одну контрольную работу посвященные расчету концентрации растворов, способам приготовления буферных растворов, измерениям и расчетам их буферной емкости и рН. Кроме того на основании своей практической работы студенты подготавливают две презентации: по буферным растворам и по определению концентрации белка.
Альтернативный курс: Нет
Программа курса
Вопросы к экзамену
Программа курса
- Принципы работы рН-метра. Правила работы на рН-метре. Калибровка рН-метра. Стандартные растворы.
- Приготовление концентрированных и разбавленных растворов щелочи (КОН и NaОН). Приготовление 0,5 и 1 М растворов соляной кислоты.
- Приготовление компонентов буферного раствора и определение их рК.
- Определение буферной емкости раствора. Влияние разведения буферного раствора на величину его рН. Влияние разведения буферных растворов на их буферную емкость.
- Спектрофотометрическое определение концентрации белка-стандарта и исследуемого белка (Х) (с неизвестной концентрацией).
- Определение концентрации исследуемого белка (Х) (с неизвестной концентрацией) различными колориметрическими методами (микробиуретовым методом, методом Лоури и микрометодом Бредфорда).
- Влияние сульфата аммония на определение концентрации белка различными методами. Влияние мочевины, сахарозы и глюкозы на определение концентрации белка различными методами.
- Влияние компонентов буферных систем, восстановителей, хелатирующих агентов и детергентов на определение концентрации белка различными методами.
Список рекомендуемой литературы
- Медведева М.В. Растворы, М., «Цифровичок», 2012.
- Медведева М.В. Гусев Н.Б. Определение концентрации белка в растворе. М., Макс Пресс, 2010.