Программа раздела практикума "Препаративная энзимология"

Руководитель - доцент М.В. Медведева


Зависимость скорости фосфоглицераткиназной реакции
от концентрации субстрата – АТР [S] в координатах Корниш-Боудена.

Раздел Большого практикума «Препаративная энзимология» ставит своей основной целью обучение студентов навыкам работы с ферментами и рассчитан на достаточно подготовленных в экспериментальном плане студентов, свободно владеющих такими методами белковой химии как колоночная хроматография, электрофорез в полиакриламидном геле, определение концентрации белка и т.п. Этот раздел особенно важен и интересен в связи с тем, что большинство сотрудников кафедры биохимии биологического факультета МГУ традиционно занимаются различными аспектами энзимологии, и некоторые из них принимают активное участие в проведении этого раздела.

В процессе выполнения индивидуальной задачи каждый студент должен получить из ткани или культуры клеток гомогенный или высокоочищенный препарат фермента, используя такие методы как гомогенизация, экстракция, центрифугирование, различные виды фракционирования (высаливание, изоэлектрическое осаждение, термообработка), кристаллизация и перекристаллизация фермента и т.п. Дальнейшая очистка проводится с помощью различных методов колоночной хроматографии. Студент оценивает чистоту полученного препарата, учится измерять его каталитическую активность, а также определяет его основные кинетические параметры (КM и Vmax). Кроме того студентам предлагается изучить действие на фермент активаторов и/или ингибиторов. В последнем случае перед студентами стоит задача определить не только тип ингибирования, но и константу ингибирования.

Практическая работа сопровождается теоретическими семинарами, на которых детально обсуждаются подходы и принципы экспериментальной работы. Заключительный семинар посвящается обсуждению полученных студентами результатов и написанию итогового отчета о проделанной работе. Кроме того на протяжении всей работы студенты знакомятся с данными литературы, позволяющими составить более полное представление о структуре и свойствах изучаемого фермента.

Примерный перечень задач:

  1. Выделение, очистка и изучение некоторых свойств гликогенфосфорилазы b из скелетных мышц кролика.
  2. Выделение, очистка и изучение некоторых свойств альдолазы из скелетных мышц кролика.
  3. Выделение, очистка и изучение некоторых свойств глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы из скелетных мышц кролика.
  4. Выделение, очистка и изучение некоторых свойств глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы Bacillus stearothermophilus.
  5. Выделение, очистка и изучение некоторых свойств 3-фосфоглицераткиназы из скелетных мышц кролика.
  6. Выделение, очистка и изучение некоторых свойств пируваткиназы из скелетных мышц кролика.
  7. Выделение, очистка и изучение некоторых свойств лактатдегидрогеназы из скелетных мышц кролика.
  8. Выделение, очистка и идентификация белка, соочищаемого с лактатдегидрогеназой и пируваткиназой из скелетных мышц кролика.
  9. Последовательное выделение, очистка и изучение некоторых свойств глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы, 3-фосфоглицераткиназы и лактатдегидрогеназы из скелетных мышц кролика.

версия для печати
Страница последний раз обновлялась 29.07.2009